روش تعیین گلوکز اکسیداز گلوکز

اصل روش. این روش بر اساس ویژگی عملکرد آنزیم گلوکز اکسیداز است. این آنزیم در حضور اکسیژن مولکولی گلوکز را اکسید می کند تا گلوکونولاکتون تشکیل شود ، که به طور خودبخود هیدرولیز می شود و به اسید گلوکونیک می کند. گلوکز اکسیداز گلوکز را اکسید می کند تا پراکسید هیدروژن (H) تشکیل شود₂اوه₂) ، که با 4-aminoantipyrine و phenol تحت عمل پراکسیداز واکنش نشان می دهد. در نتیجه ، یک ترکیب رنگ صورتی تشکیل می شود که تراکم نوری آن در 510 نانومتر متناسب با غلظت گلوکز در نمونه است.

گلوکز + O₂ + ح₂اوه اسید گلوکونیک + H₂اوه₂

2 ن₂اوه₂ + 4-آمینوسیپیرین + فنل quinonymine + 4H₂اوه

تجهیزات CPK ، سانتریفیوژ ، ترموستات ، قفسه ، لوله آزمایش ، پیپت ، مواد بیولوژیکی ، معرفهای موجود در محلول کار.

نمونه آزمایشی ، میلی لیتر

نمونه استاندارد ، ml

آزمایش بیکار (ن₂پ) ، میلی لیتر

محلول کالیبراسیون گلوکز (مرجع)

لوله‌ها در یک دماسنج در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انکوبه می شوند ، سپس در یک CPC با یک فیلتر سبز در قایق ها با ضخامت لایه 5 میلی متر در مقابل نمونه خالی رنگ آمیزی می شوند.₂اِ) رنگ صورتی به مدت 1 ساعت پس از انکوباسیون پایدار است.

محاسبه میزان گلوکز توسط فرمول تولید می شود:

C =استاندارد x C که در آن

C مقدار گلوکز در نمونه آزمایشی ، mol / l ،

بیرون - تراکم نوری نمونه ،

می خورد - تراکم نوری نمونه کالیبراسیون ،

استاندارد C - محتوای موجود در محلول کالیبراسیون ، mol / l.

مقادیر عادی:  نوزادان - 2.8-4.4 میلیمول در لیتر

 کودکان - 3.9-5.8 میلیمول در لیتر

 بزرگسالان - 3.9 - 6.2 mmol / l

هیپوگلیسمی (GHC).افزایش قند خون به دلایل مختلفی وجود دارد که براساس آنها ، دو گروه قند خون مشخص می شوند.

1. عایق بندی - همراه با انسولین ناکافی در بدن یا به دلیل ناکارآمدی عملکرد آن.

2. خارج از بدن (خارج از بدن) - به تاثیر انسولین بستگی ندارد.

فرآیندهای زیر در شکل گیری HHC بیشترین اهمیت را دارند: افزایش تجزیه گلیکوژن ، افزایش neoglucogenesis ، مهار سنتز گلیکوژن ، کاهش مصرف گلوکز بافت تحت تأثیر آنتاگونیست های انسولین هورمونی: سوماتوتروپین ، گلوکوکورتیکوئیدها ، تیروکسین ، تیروتروپین.

با مصرف بیش از حد گلوکز در خون (به عنوان مثال ، قند خون با بار قند) قند خون شایع است. قند خون "کبدی" در ضایعات منتشر کبدی رخ می دهد.

هایپرگلیسمی مداوم و شدید اغلب با دیابت همراه است. مرسوم است که دیابت وابسته به انسولین و دیابت غیر وابسته به انسولین یا به ترتیب دیابت نوع I و دیابت نوع II را جدا کنید. تشکیل دیابت نوع اول در درجه اول با اختلال در سنتز و متابولیسم انسولین همراه است.

گروه دوم قند خون در درجه اول با عملکرد بیش از حد غدد درون ریز تولید کننده هورمون ها - آنتاگونیست انسولین - همراه است. این بیماری در بیماری هایی مانند سندرم ایتنکو-کوشینگ و بیماری ، آکرومگالی ، تیروتوکسیکوز ، فئوکروموسیتوم ، گلوکوژانما مشاهده می شود. سطح قند خون با برخی از بیماریهای کبدی افزایش می یابد (به ویژه در 10 تا 30٪ بیماران مبتلا به سیروز کبدی) ، هموکروماتوز (سیروز کبد رنگدانه ، دیابت برنز).

هیپوگلیسمی (GPG) - کاهش قند خون - که اغلب با افزایش مطلق یا نسبی سطح انسولین در خون همراه است. در نتیجه عدم تعادل بین شدت فرآیندهای گلیکوژنولیز و گلیکونوژنز در کبد در هپاتیت حاد و مزمن ، سیروز ، دیستروفی کبدی حاد و تحت حاد ، سیروز ، دیستروفی کبدی حاد و تحت حاد ، مسمومیت با الکل ، مسمومیت با آرسنیک ، فسفر ، با انسداد طولانی مدت انسداد کبد ، انسداد اولیه . کاهش غلظت گلوکز خون اغلب در بیمارانی که از سرطان مری و سایر تومورهای بدخیم محلی سازی خارج از لوزالمعده (فیبروم ، فیبروسارکوم ، نوروما) و همچنین با استفراغ غیرقابل تحمل ، بی اشتهایی ، دیابت کبدی ، اورمیه ، شیردهی سودمند و گلوکوزوری در زنان باردار مشاهده می شود.

هیپوگلیسمی به دلیل ترومای روانی ، آنسفالیت ، خونریزی زیر قطبی ، تومور مغزی می تواند منشأ مرکزی باشد.

1. اختلالات ارثی در هضم کربوهیدرات ها.

2. چه نوع هیپرگلوکوزمی برای شما شناخته شده است؟

3. دلایل هیپرگلوکوزمی پاتولوژیک چیست؟

4- علت دیابت وابسته به انسولین چیست؟

5- علل بیوشیمیایی بیماریهای ارثی چیست: الف) گلیکوژنوز؟ ب) آگلوکوژنوز؟ ج) فروکتوزمی؟ د) گالاکتوزمی؟

6. تغییرات بیوشیمیایی در متابولیسم کربوهیدرات در طی روزه داری چیست؟

7. اصل روش تعیین میزان تحمل گلوکز.

چه موقع روش گلوکز اکسیداز تجویز می شود؟

از این آزمایش برای تشخیص اختلال در تحمل قند و ایجاد دیابت و همچنین در اوج بیماری استفاده می شود. اما برای چنین اهداف ، تجزیه و تحلیل بندرت استفاده می شود ، این به دلیل هزینه بالای آن و انتظار طولانی از نتیجه است. بیشتر اوقات ، تعیین گلوکز در خون و ادرار با استفاده از این روش در تشخیص افتراقی بیماری هایی مانند:

فوراً شکر کاهش می یابد! دیابت به مرور زمان می تواند منجر به یک دسته کامل از بیماری ها مانند مشکلات بینایی ، شرایط پوست و مو ، زخم ها ، گانگرن و حتی تومورهای سرطانی شود! مردم برای عادی سازی میزان قند خود ، تجربه تلخ را آموزش داده اند. ادامه مطلب

• سندرم عدم تحمل لاکتوز ،
• عدم تحمل فروکتوز ،
• ترشح فروکتوز با مایعات بدن ،
• افزایش غلظت پنتوز در ادرار.

مزیت بدون شک آزمایش گلوکز اکسیداز صحت آن است.

اساس این روش چیست؟

روش های مختلفی برای تعیین غلظت گلوکز در خون وجود دارد ، اما گلوکز اکسیداز دقیق ترین است. براساس این واقعیت است که در طول تعامل شکر با اکسیژن اتمسفر ، معرف اکسیده می شود. پراکسید هیدروژن درون محلول آزاد می شود. این ماده برای تشکیل ترکیب رنگی با اورتوتولویدین در تعامل است. برای رفتار این واکنش ، حضور آنزیم های ویژه ضروری است. در طول واکنش اکسیداسیون ، گلوکز اکسیداز باید وجود داشته باشد ، و هنگام لکه گیری مایع ، پراکسیداز باید وجود داشته باشد. شدت رنگ محلول به مقدار گلوکز بستگی دارد و از نظر میزان زیاد آن شدیدترین است.

جوهر تعیین گلوکز اکسیداز گلوکز

ارزیابی نتیجه با استفاده از روش کمی فتومتری پس از مدت زمان مشابه انجام می شود. استفاده از محلول کالیبراسیون که حاوی یک مقدار قند اعلام شده مشخص است ، الزامی است و با شروع آن می توانید غلظت گلوکز در مایعات بدن ، غالباً در خون را قضاوت کنید.

تجزیه و تحلیل چگونه انجام می شود؟

مواد از بیمار روی معده خالی گرفته می شوند. برای آزمایش از خون وریدی به مقدار 5 میلی لیتر استفاده می شود. در آستانه تشخیص ، بیمار یک رژیم غذایی دقیق نشان داده می شود. این امر باعث می شود كه در مورد صحت نتیجه قضاوت كنید و خطاهای تحلیل احتمالی را حذف كنید. 2 روز قبل از مصرف خون ، بیمار باید عادت های بد نوشیدن الکل و سیگار کشیدن را کنار بگذارد. همچنین لازم است مصرف غذاهای خیلی شیرین را محدود کنید و هر زمان ممکن از موقعیتهای استرس زا جلوگیری کنید.

برای به دست آوردن پلاسما با قند ، سانتریفیوژ می شود.

بیشتر اوقات ، این روش برای تعیین غلظت گلوکز توسط سانتریفیوژ انجام می شود ، که عناصر فرم جدا شده اند. مقدار قند از قبل در پلاسما تعیین می شود. هنگامی که تمام معرفهای لازم به آن اضافه شوند ، اگر آزمایش در دمای اتاق انجام شود ، رنگ بعد از 20 دقیقه مشاهده می شود. محاسبه گلوکز طبق برنامه کالیبراسیون یا با استفاده از قاعده وعده انجام می شود.

معرفهای تحقیقاتی

برای تعیین قند ، استفاده از روشهای اکسپرس برای تعیین قند خون در خون راحت تر است. این به دلیل سهولت استفاده و نتایج سریع است. علاوه بر این ، بیمار نیازی به مراجعه به آزمایشگاه یا بیمارستان ندارد. اما برخلاف آزمایش گلوکز اکسیداز ، چنین تشخیصی غیرقابل اعتماد است. از آنجا که گلوکز را از قندهای دیگر متمایز نمی کند و غلظت آنها را با هم تعیین می کند.

اساس واکنش گلوکز اکسیداز محلول کلرید سدیم 9٪ و سولفات روی 50٪ است. آنها در مرحله سانتریفیوژ خون اضافه می شوند. بعلاوه از محلول بافر با اسید استیک و سدیم استات استفاده می شود. روش تیتراسیون pH آن را در 4.8 تعیین می کند. پس از آن ، گلوکز اکسیداز اضافه می شود ، که به واسطه آن هیدروژن پراکسید و پراکسیداز آزاد می شوند ، که در رنگ آمیزی محلول به غلظت مورد نظر شرکت می کنند تا نتیجه دقیقی کسب کنند.

هنجارها در تجزیه و تحلیل

اندازه گیری قند در واحدهای ویژه انجام می شود - میلی لیتر در لیتر محلول.

آزمایش خون گلوکز اکسیداز روی معده خالی الزامی است و برای این کار از پلاسما یا سرم استفاده می کنید. هنجار کمیت آن برای بزرگسالان هم برای زنان و هم برای مردان 3.3-5.5 است. برای کودکان زیر 15 سال ، این رقم کمی پایین تر است و از 3.2-5.3 متغیر است. در نوزادان ، قند خون 1.7-4.2 است. افزایش شاخص ها با پیشرفت بیمار مبتلا به دیابت یا اختلال در تحمل گلوکز مشاهده می شود. این بیماری پیش دیابت است و اگر به موقع درمان نشود ، به زودی به پیشرفت این آسیب شناسی شدید منجر می شود.

آیا هنوز درمان دیابت غیرممکن است؟

با قضاوت این واقعیت که اکنون این خطوط را می خوانید ، پیروزی در مبارزه با قند خون بالا هنوز در دست شما نیست.

و آیا قبلاً در مورد معالجه بیمارستان فکر کرده اید؟ این قابل درک است ، زیرا دیابت یک بیماری بسیار خطرناک است ، که در صورت عدم درمان ممکن است منجر به مرگ شود. تشنگی مداوم ، ادرار سریع ، تاری دید. همه این علائم دست اول برای شما آشناست.

اما آیا می توان علت را به جای اثر درمان کرد؟ توصیه می کنیم مقاله ای در مورد درمان های فعلی دیابت بخوانید. مقاله را بخوانید >>